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新型二代羊水培養(yǎng)基的檢驗方法

發(fā)布日期: 2020-08-27
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新型二代羊水培養(yǎng)基的檢驗方法:

采用如下方法做羊水細胞原位培養(yǎng)或按其它常規(guī)羊水細胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)羊水細胞:

1、取羊水20ml, 以120xg離心十分鐘。


2、在無菌操作臺操作,棄上清液。


3、加入2ml羊水培養(yǎng)基,輕輕 混勻,制成細胞懸液。


4、取35mm培養(yǎng)皿,在蓋子上面及下半部側(cè)壁都做好標記(包括編號、姓名、日期等)。


5、滴加0.5ml細胞懸液至培養(yǎng)皿中的蓋玻片(25px2)中央,用移液管尖小心攤開。注意液體不能流出蓋玻片。


6、將培養(yǎng)皿置于5% CO2、濕度飽和的37度培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)。


7、24小時后,給每塊蓋玻片補加1.5ml培養(yǎng)基。


8、接種7天后觀察細胞。當發(fā)現(xiàn)蓋玻片上細胞克隆數(shù)大于10個,每個克隆細胞數(shù)大于300且克隆邊沿細胞呈旺盛分裂狀態(tài)時,即可收獲細胞。否則,繼續(xù)培養(yǎng)1~2天。當克隆邊沿細胞融合度大于90%,呈現(xiàn)停止分裂狀態(tài)時,意味細胞已經(jīng)老化,不適合用作分析。


9、適合收獲的細胞按常規(guī)方法使細胞分裂停止在有絲分裂中期并制作細胞片,經(jīng)吉姆薩染色處理后做染色體核型分析。


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