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?生物制品生產(chǎn)和檢驗用牛血清質(zhì)量標準

發(fā)布日期: 2022-11-02
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 用于生物制品生產(chǎn)和檢驗的新生牛血清為從出生 14 小時內(nèi)未進食初乳的新生小牛采血,分離血清,經(jīng)濾過除菌制成;胎牛血清為經(jīng)心臟采集 230~240 日齡的胎牛全血,分離血清,經(jīng)濾過除菌制成。主要用于細胞培養(yǎng)。【性狀】 澄清稍黏稠的液體,無溶血或異物,凍融后可能存在少量絮狀沉淀。【無菌檢驗】 按附錄 3306 進行檢驗,應無菌生長?!局гw檢驗】 按附錄 3308 進行檢驗,應無支原體生長?!就庠床《緳z驗】 取被檢血清樣品 10 ml,3000 r/min 離心 10 分鐘,取上清液,按附錄 3305進行檢驗,應無外源病毒污染。【特異性抗體測定】 根據(jù)血清的用途確定測定的抗體種類,采用血清學方法進行檢驗,應符合規(guī)定?!炯毦鷥?nèi)毒素測定】 按《中國獸藥典》一部附錄進行檢驗,每毫升血清的內(nèi)毒素含量應低于10 EU?!炯毎鲋吃囼灐?下列方法,任擇其一。 

(一)SP2/0 增殖試驗法。取生長良好的 Sp2/0 小鼠骨髓瘤細胞,棄營養(yǎng)液,用無血清 MEM 配成每毫升 30 萬~50 萬細胞懸液,計數(shù)細胞后,用無血清 MEM 在 96 孔細胞板上作 1:200、1:400、1:800、1:1600 稀釋,每稀釋度加 8 孔,每孔 0.1 ml,每孔再分別補加 0.1ml 含 20%參考血清或 20%被檢血清 MEM 營養(yǎng)液,置 5%CO2 培養(yǎng)箱 37℃培養(yǎng)至 48 小時,倒置顯微鏡下計數(shù),取每孔克隆數(shù)均在 30~50 之間的稀釋度的 8 個孔,求和計為總克隆數(shù)。計算被檢血清和參考血清的絕對克隆形成率和相對克隆形成率。絕對克隆形成率 =該稀釋度形成的細胞克隆總數(shù)×100%該稀釋度接種 Sp2/0 懸液細胞總數(shù)相對克隆形成率 =胎牛血清(或新生牛血清)的絕對克隆形成率×100%參考血清的絕對克隆形成率判定標準:參考血清的絕對克隆形成率應不低于 20% 胎牛血清的相對克隆形成率應不低于 80% 新生牛血清相對克隆形成率應不低于 50% 

(二)Vero 細胞增殖試驗法。將已長成良好單層 Vero 細胞按常規(guī)傳代方法,用 0.25%胰酶消化分散制備成懸液,1000~1500rpm,離心 10min,棄去上清。將細胞沉淀用含 10%待檢血清的 MEM 細胞培養(yǎng)液重懸,計數(shù)后配制成 104個細胞/ml 的細胞懸液。接種 25cm2細胞瓶 2 個,每瓶接種 10mL。將細胞置于 37℃生化培養(yǎng)箱中連續(xù)培養(yǎng) 48h 后,分別消化分散,1000~1500rpm,離心 10min,棄去上清,每瓶細胞沉淀分別用 1mL 無血清的 MEM 吹散混勻,進行計數(shù),計算 2 瓶細胞數(shù)的算術(shù)平均數(shù)作為該細胞的細胞數(shù)。新生牛血清培養(yǎng)的細胞增殖數(shù)應不低于 3.0×104個細胞/ml,胎牛血清培養(yǎng)的細胞增殖數(shù)應不低于 5.0×104個細胞/ml

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