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使用細(xì)胞株有哪些細(xì)節(jié)要注意

發(fā)布日期: 2025-04-17
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  細(xì)胞株是科研工作中至關(guān)重要的工具,其正確使用對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性具有關(guān)鍵意義。
  細(xì)胞株的選擇是首要環(huán)節(jié)。要根據(jù)研究目的來(lái)挑選合適的細(xì)胞株。不同的細(xì)胞株具有不同的生物學(xué)特性,如腫瘤細(xì)胞株、正常細(xì)胞株、干細(xì)胞株等。如果是研究腫瘤發(fā)病機(jī)制,可能會(huì)選擇特定的腫瘤細(xì)胞株,如肺癌細(xì)胞株 A549、結(jié)直腸癌細(xì)胞株 SW620 等。這些細(xì)胞株應(yīng)具備明確的來(lái)源、背景信息和已驗(yàn)證的生物學(xué)特性,可通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)或咨詢專業(yè)的細(xì)胞庫(kù)獲取詳細(xì)信息。
  細(xì)胞的復(fù)蘇是使用細(xì)胞株的重要起始步驟。從液氮罐中取出細(xì)胞凍存管后,要迅速放入 37℃的水浴中,不斷搖晃,確保凍存液快速融化。這個(gè)過(guò)程要控制在 1 - 2 分鐘內(nèi),以減少室溫下融解過(guò)程對(duì)細(xì)胞的損傷。融化后,將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中,輕輕吹打均勻,然后進(jìn)行離心,去除凍存液中的 DMSO 等有害物質(zhì)。
  培養(yǎng)條件的優(yōu)化對(duì)于細(xì)胞株的生長(zhǎng)至關(guān)重要。溫度通常維持在 37℃,二氧化碳濃度保持在 5%左右,這是大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞所需的環(huán)境條件。培養(yǎng)基的選擇也要根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)來(lái)確定,不同的細(xì)胞株對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生長(zhǎng)因子等的需求有所差異。例如,一些癌細(xì)胞株可能需要添加血清、胰島素、谷氨酰胺等特殊成分。
  細(xì)胞的傳代也有一定技巧。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到 80% - 90%匯合度時(shí),需要進(jìn)行傳代。首先棄去舊的培養(yǎng)基,用 PBS 清洗細(xì)胞以去除殘留的血清和雜質(zhì)。然后加入胰酶消化液,消化時(shí)間和溫度要嚴(yán)格控制,避免過(guò)度消化損傷細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞變圓、彼此分離時(shí),加入含有血清的培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹打使細(xì)胞脫壁,按照適當(dāng)?shù)谋壤臃N到新的培養(yǎng)皿中。
  細(xì)胞的凍存同樣不可忽視。當(dāng)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),可以進(jìn)行凍存。凍存液一般由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清和 DMSO 按一定比例混合而成。將細(xì)胞與凍存液充分混合后,分裝到凍存管中,做好標(biāo)記,包括細(xì)胞名稱、傳代次數(shù)、凍存日期等信息。然后將凍存管逐步降溫,先放入 4℃冰箱冷藏一段時(shí)間,再轉(zhuǎn)移到 - 80℃超低溫冰箱短期保存或液氮罐中長(zhǎng)期保存。
  在整個(gè)細(xì)胞株的使用過(guò)程中,嚴(yán)格的無(wú)菌操作是必須遵循的原則。使用前要對(duì)操作臺(tái)面、器械等進(jìn)行消毒,操作過(guò)程中要注意防止微生物污染。同時(shí),要定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行檢查,觀察其形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)等,確保細(xì)胞株沒(méi)有發(fā)生變異或被污染。只有這樣,才能充分發(fā)揮細(xì)胞株在科研中的作用,獲得可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
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